膠原酶是從溶組織梭狀細胞芽孢桿菌提取制備的,主要水解結締組織中膠原蛋白成分。當擬消化的組織較硬,內含較多結締組織或膠原成分時,用胰蛋白酶解離細胞的效果較差,這時可采用膠原酶解離細胞法。 膠原酶僅對細胞間質有消化作用而對上皮細胞影響不大。因此適于消化分離纖維性組織、上皮及癌組織,可使上皮細胞與膠原成分分離而不受損害。常用劑量為*終濃度200U/ml(約為1mg/mL)或0.03%~0.3%。膠原酶分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝細胞膠原酶,要根據所要分離消化的組織類型選擇膠原酶類型。
關于膠原酶的配制和保存:
1.配制的緩沖液:膠原酶應該用氏液來配。不能用三蒸水因為滲透壓太低細胞不能耐受,也不能用培養液因為其中的成分復雜對消化有影響,*也不用氏液因為Ca2+Mg2+離子易與一些成分結合形成沉淀影響分離(但這是理論上,我曾經試過結果也還不錯),PBS文獻上沒見過,但應該理論上可以用的
2.配制的方法:
書上是36.5攝氏度攪拌溶解2h;4攝氏度過夜;0.22um過濾除菌;
但網上有人的方法是:室溫下直接溶,好溶,溶完直接0.22um過濾除菌,據說也可行;
3.配制的濃度:1mg/ml、0.1-0.5%、0.025%(不同組織采用不同濃度)
4.配置后保存方法:
有的人推薦現用現配;
4度存放,*1~2周內用完;
長時間貯存宜在-20攝氏度,用前可放37度溶解,但溶解時間不能過久,防止酶活性受影響;
5.消化組織時間:取決于消化液濃度和組織類型,一般消化時間為2-3小時或者4度過夜
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